Metode smear (oles) dalam pembuatan apus darah

Histologi merupakan ilmu yang mempelajari tentang jaringan pada hewan dan tumbuhan dengan menggunakan pengamatan mikroskop. Dalam histologi dikenal beberapa metode untuk membuat sediaan (preparat) dari jaringan hewan yaitu  metode oles (smear), metode beku, metode seloidin, metode parafin, dan lain-lain.

Preparat apus darah adalah salah satu objek dalam pengamatan histologi. Preparat apus darah dbuat dengan metode smear/oles yaitu metode pembuatan sediaan dengan jalan mengoles atau membuat selaput (film) dari substansi yang berupa cairan jaringan diatas gelas benda yang bersih dan bebas lemak, untuk selanjutnya difiksasi, diwarnai dan ditutup dengan gelas penutup.

apus darah

Gambar : Apus darah (Wikipedia, 2016)

Preparat apus darah yang baik untuk diamati adalah apusan darah yang tipis dan terwarnai dengan jelas (bisa diamati strukturnya). Adapun langkah-langkah untuk pembuatan preparat apus darah yang baik sebagai berikut :

  1. Menyediakan alat dan bahan

Alat yang digunakan dalam pembuatan apus darah adalah gelas objek, gelas penutup, jarum lanset, pipet tetes, gelas beaker, staining jar dan mikroskop.

Sedangkan bahan yang diperlukan adalah darah perifer, alkohol 70%, fiksatif methanol, pewarna giemsa 3% dan canada balsam.

  1. Pengambilan darah

Darah yang digunakan dalam pembuatan apus darah biasanya diambil dari ujung jari (jari tengah jari manis atau jari kelingking) yang relatif kulitnya tipis dan mudah untuk diambil melalui pembuluh kapiler (darah perifer). Sebelum ditusuk, bagian ujung jari dan ujung jarum lanset diusap dulu dengan alkohol 70% untuk menghindarkan terjadinya infeksi. Lalu ujung jari ditusuk dengan jarum lanset dengan kedalaman kurang lebih 3 mm hingga darah keluar. Tetesan yang keluar pertama sebaiknya dibuang karena masih mengandung  banyak cairan jaringan. Baru tetesan yang kedua dan seterusnya diambil untuk dibuat sediaan oles.

3. Pengapusan darah di gelas objek

  • Sediakan 2 gelas benda yang bersih. Gelas A untuk meletakkan darah dan yang B untuk mengapus darah (pilih yang ujung gelas bendanya rata).
  • Tetesan darah yang kedua dapat diambil dengan pipet tetes atau langsung diteteskan pada gelas benda A diletakkan pada sisi kanan gelas benda, kira-kira 2,5 cm dari tepi kanan gelas benda.
  • Gelas benda B diletakkan disisi kiri tetesan darah dengan membentuk sudut 450
  • Geserlah belas benda B ke kanan (belakang) sampai menyentuh tetesan darah dan membentuk kapilaritas.
  • Setelah terbentuk kapilaritas, kemudian doronglah gelas benda B ke arah kiri (depan) dengan kontinu sehingga membentuk apusan yang bagus.
  • Tipis tebalnya apusan darah dapat diamati dibawah mikroskop
  • Setelahnya apusan darah dibiarkan kering dulu
  1. Fiksasi

Setelah apusan darah kering, kemudian difiksasi dengan larutan fiksatif methanol 10% selama 3-4 menit di dalam staining jar. Fiksasi ini bertujuan agar apusan darah melekat di gelas benda dan mempertahankan sel dalam bentuk normal. Kemudian setelah difiksasi, preparat dikeringkan dulu hingga hingga kering larutan fiksatifnya.

  1. Pewarnaan

Setelah dikeringkan, baru diwarnai menggunakan larutan giemsa 3% dalam staining jar selama 30-40 menit. Kemudian cucilah dengan akuades dingin yang sebelumnya telah dididihkan terlebih dulu sampai bersih. Kemudian dikeringkan lagi di udara.

  1. Penutupan dengan gelas penutup

Supaya awet, preparat apus darah ditutup  dengan gelas penutup yang diolesi canada balsam terlebih dulu.

Preparat apus darah yang sudah jadi dapat diamati sel-sel darahnya meliputi eritrosit, leukosit dan trombosit.  Eritrosit jumlahnya melimpah, bentuknya bulat, tampak berwarna merah muda tanpa nukleus (inti sel). Bila dijumpai Leukosit, sel ini tampak terdapat inti sel berwarna ungu yang bertipe 5 jenis leukosit (neutrofil, limfosit, monosit, eusinofil dan basofil). Sedangkan trombosit berbentuk mirip cakram, tak berinti, dengan diameter 2-4 mikron dan jarang teramati dengan pemulasan giemsa.